熒光顯微鏡的工作原理

熒光顯微鏡的工作原理

熒光顯微鏡是不太了解常見(jiàn)的顯微鏡，下面向我們大家介紹分析一下熒光顯微鏡的原理。工業(yè)視頻顯微鏡將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝像系統(tǒng),顯示器或者電腦相結(jié)合,達(dá)到對(duì)被測(cè)物體的放大觀察的目的。金相顯微鏡電腦型金相顯微鏡或是數(shù)碼金相顯微鏡是將光學(xué)顯微鏡技術(shù)、光電轉(zhuǎn)換技術(shù)、計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)**地結(jié)合在一起而開(kāi)發(fā)研制成的高科技產(chǎn)品，可以在計(jì)算機(jī)上很方便地觀察金相圖像，從而對(duì)金相圖譜進(jìn)行分析，評(píng)級(jí)等以及對(duì)圖片進(jìn)行輸出、打印。體視顯微鏡指從不同角度觀察物體,使雙眼引起立體感覺(jué)的雙目顯微鏡。

熒光顯微鏡原理：

在一百年前，斯托克（STOKES)發(fā)現(xiàn)自然界有許多物質(zhì)能在較短波長(zhǎng)光線照射下， 發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光線，也即這些物質(zhì)在被紫外光、紫光、蘭光或綠光照射后，能激發(fā)出藍(lán)色、綠色、黃色或紅色的熒光，叫做光致熒光。

因此，1911年，奧地利科學(xué)家K.Reichert首先制作了一種實(shí)用的熒光顯微鏡，用碳弧燈作為激發(fā)光源，用液體濾光片分離所需的紫外光，并用普通顯微鏡觀察。

當(dāng)時(shí)，熒光顯微鏡在植物學(xué)和礦物學(xué)中使用初級(jí)熒光技術(shù)以獲得良好的分析結(jié)果，但由于人和動(dòng)物的初級(jí)熒光太弱，不能用于人和動(dòng)物的醫(yī)學(xué)研究。

1933年，海廷格發(fā)現(xiàn)了第二種熒光。標(biāo)本經(jīng)熒光染色后，用短波光激發(fā)，獲得強(qiáng)熒光，適用于人和動(dòng)物的研究。

免疫學(xué)的重要對(duì)象是抗原和抗體的反應(yīng)社會(huì)問(wèn)題，由于自身抗原抗體反應(yīng)的高度可以特異性，所以當(dāng)抗原抗體可能發(fā)生發(fā)展反應(yīng)時(shí)，只要我們知道他們其中作為一個(gè)影響因子，也就知道了另一個(gè)主要因子，用普通染料來(lái)使抗體（或抗原）著色，由于被視覺(jué)系統(tǒng)所能感知的染料分子的數(shù)量比較大，往往破壞了抗原或抗體的特異活性而不能沒(méi)有達(dá)到教學(xué)目的。

熒光染料本身作為發(fā)射體產(chǎn)生顏色，可以在暗背景下觀察到，對(duì)人類(lèi)視覺(jué)高度敏感，并且可以在顯微鏡下用很少的光感知，這使得熒光染料成為一種合適的標(biāo)記物，不僅保持了標(biāo)記抗體的特異性活性，而且可以在熒光顯微鏡下用肉眼檢測(cè)到。

在制備熒光樣品過(guò)程中，將抗原固定在載玻片上，然后用熒光抗體染色（熒光染料與抗體結(jié)合）一段時(shí)間，將抗體固定在抗原上，否則用水沖洗掉，*后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。

每一種細(xì)菌方面都有一個(gè)自己的特異抗原，因此，在原則上，應(yīng)用充分的特異的熒光抗體，可以從血清學(xué)上鑒定沒(méi)有任何作為一種通過(guò)細(xì)菌。

由于熒光染料只能在很稀的濃度下激發(fā)出明亮的熒光，因此一般對(duì)身體無(wú)害，從而為體內(nèi)觀察提供了廣泛的可能性，如研究功能器官的過(guò)程和微觀結(jié)構(gòu)，一些代謝變化等。此外，熒光染料染色法非常簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，易于制備標(biāo)本，特別適用于快速工作，如傳染病的快速診斷等。

以下為學(xué)生激發(fā)產(chǎn)生熒光時(shí)的原理圖：

1. 光源——它提供激發(fā)熒光所需要的足夠強(qiáng)的激發(fā)光（較短波長(zhǎng)光線），通常它是超高壓汞燈(HBO200, HBO100或B050)。